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保存血清時應該注意哪幾點
血清的保存應該注意以下幾點:
(1)需要長期保存的血清必須儲存于-20℃-70℃低溫冰箱中。4℃冰箱中保存時間切勿超過1個月,由于血清結冰時體積會增加約10%,因此,血清在凍入低溫冰箱前,必須預留一定體積空間,否則易發生污染或玻璃瓶凍裂。
(2)熱滅活是指56℃,30分鐘加熱已*解凍的血清。加熱過程中須規則搖晃均勻,此熱處理的目的是使血清中的補體成分(complement)滅活,除非必須,一般不建議作此熱處理,因為熱處理會造成血清沉淀物顯著增多,而且還會影響血清的質量,補體參與反應有:細胞毒作用,平滑肌細胞收縮,肥大細胞和血小板釋放組胺,增強吞噬作用,促進淋巴細胞和巨噬細胞發生化學趨化和活化。
(3)瓶裝血清解凍需采用逐步解凍法:-20℃至-70℃ 低溫冰箱中的血清放入4℃冰箱中溶解1天。然后移入室溫,待全部溶解后再分裝。在溶解過程中需不斷輕輕搖晃均勻(小心勿造成氣泡),使溫度與成分均一,減少沉淀的發生。切勿直接將血清從-20℃進入37℃解凍,這樣因溫度改變太大,容易造成蛋白質凝集而出現沉淀。
(4)一般廠商提供的血清為無菌,無需再過濾除菌,如發現血清有懸浮物,則可將血清加入培養液內一起過濾,切勿直接過濾血清。
(5)血清中的沉淀物、絮狀物:主要是血清中的脂蛋白變性及解凍后血清中纖維蛋白造成,這些絮狀物不會影響血清本身的質量,可用離心3000rpm,5分鐘去除,也可不用處理,顯微鏡下"小黑點"。經過熱處理過的血清,沉淀物的形成會顯著增多。有些沉淀物在顯微鏡下觀察象"小黑點",常誤認為血清受污染,一般情況下,此小黑點不會影響細胞生長,但如果懷疑血清質量,則應立即停止使用,更換另一批號的血清。
(6)切勿將血清在37℃放置太久,否則血清會變得渾濁,同時血清中的有效成分會破壞而影響血清質量。
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