ELISA試驗以靈敏度較高、特異性較好的特點在科研上得到了廣泛的應用，但操作中的各個環節對試驗的檢測效果影響較大，人ELISA試劑盒如不注意，有可能導致顯色不全、花板等結果。

下面將操作中各個環節常出現問題解決辦法總結于下：

選擇試劑：

   選擇質量優良的檢測試劑，嚴格按照試劑說明書進行操作，操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。

標本收集與保存：

   避免使用肉眼可見的溶血標本、高脂標本和混濁標本；2-8℃下，標本可放置24-48小時，長期保存需放置-20℃下。

請避免反復凍融。

試劑盒中會有提示，一般需要準備的有：

   洗滌液；用前配制；有的試劑盒會標明，配好的4度下一般可以放一個月；如果沒有標明，盡量用新鮮的，不要多配制。

顯色液（有A液和B液的），用前15分鐘配制；

   標準品：有的試劑盒中標準品是已經配制好的，4度保存；有的是要現配制的；按照說明書操作；

     濃縮生物素結合的二抗和HRP：如果需要配制，試劑盒沒注明配好可以保存多久的話，盡量現配現用（用前15分鐘配制）； 

   原則是：試劑盒上沒有指出配制物的儲藏方式的話，應該現配現用；不要怕麻煩；還有小瓶的管子開蓋前要離心，以免蓋子上粘連以后總量不夠。

       加 樣：室溫溫育的試劑，特別是溫育時間比較短的實驗操作的試劑，加樣對數據的影響比較大，特別要注意加樣問題。

不好的操作原因：

1、不會正確使用加樣器；

2、血清或血漿標本分離不好即進行加樣；

3、人ELISA試劑盒手工操作中，加樣板過多造成加樣後放入孵箱前等待時間過長（特別是室內溫度較高時）；

4、加完標本再加酶試劑時酶濺出孔外。